[의학,약학] [미생물학 실험] 세포로부터의 DNA 분리, 정제
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작성일 20-08-23 20:32
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식물과 대장균의 genomic DNA 분리,추출의 차이점
생세포로부터의 DNA 분리, 정제
유전 Engineering을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다
1. 제 1 타입은 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요.
2. 제 2 타입은 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다. 그러나 파지 캡시드(단백질)를 제거하기 위해선 특수한 방법이 필요하다.
3. 제 3 타입은 파지 DNA이 며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 파지 DNA는 감염세포로부터 보다는 파지 자체에서 분리되는 것이 일반적이기 때문에 세균 DNA에 의해 오염되는 문제는 없다. 그러나 파지 캡시드(단백질)를 제거하기 위해선 특수한 방법이 필요하다. 예외적으로 대장균(E. coli) 세포로부터 M13의 dsRF를 분리할 때는 플라스미드 분리 때와 같은 방법이 사용된다된다.
3.1 Total cell DNA의 분리
세균 세포의...
식물과 대장균의 genomic DNA 분리,추출의 차이점
생세포로부터의 DNA 분리, 정제
유전 Engineering을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다
1. 제 1 타입은 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요.
2. 제 2 타입은 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다.
3. 제 3 타입은 파지 DNA이 며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 파지 DNA는 감염세포로부터 보다는 파지 자체에서 분리되는 것이 일반적이기 때문에 세균 DNA에 의해 오염되는 문제는 없다.
3.1 Total cell DNA의 분리
세균 세포의 배양물로부터 total DNA를 준비하는 방법은 4 단계로 나눌 수 있다
①세포배양액 - 증식, 수확(원심분리 이용)
②세포파괴 - 내용물 방출
③DNA만 분리 - 단백질 제거(페놀 처리), RNA제거(Rnase 처리)
④DNA 농축 - 2 vol.의 에탄올(EtOH) 처리
3.1.1 세균 배양물의 증식 및 수확
4. Defined medium : 배지의 모든 구성성분(成分)이 알려져 있는 배지로 정밀하게 통제되는 조건에서 세균 배양물을 증식시켜야 할 때 사용.
5. Undefined medium : 배지의 구성성분(成分)에 대한 자세한 성분(成分)명과 함량이 알려져 있지 않은 배지로 단순히 DNA분리를 위한 경우에 적절.
37℃, LB 배지, 150~250 rpm shaking incubator에서 E. coli의 generation time(doubling time)은 20분이고 최대 밀도(maximum density)인 약 2~3×109 cells/㎖에 도달할 때까지 분…(To be continued )
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실험결과/생물의학
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다. 예외적으로 대장균(E. coli) 세포로부터 M13의 dsRF를 분리할 때는 플라스미드 분리 때와 같은 방법이 사용된다된다.
